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Protocolo abierto para la clonación independiente de Ligase


La clonación independiente de ligasa es un protocolo que permite integrar un inserto en un vector sin ligadura. Utiliza T4 ADN polimerasa con solo ATP para masticar primero los extremos romos para crear extremos largos y pegajosos y luego un tratamiento con polimerasa con complementos completos de dNTP para completar el vector.

Si bien hay varios artículos y recursos interesantes que describen el procedimiento, realmente me gustaría un protocolo con concentraciones, temperaturas y tiempos, que estoy teniendo problemas para encontrar. OpenWetWare, por ejemplo, solo tiene páginas de resguardo sin detalles. ¿Alguien puede señalar una receta completa paso a paso para que esto funcione, una vez que haya diseñado las imprimaciones?


Puede buscar la clonación de Gibson Assembly o Circular Polymerase Extension (CPEC). Para ambos, el sitio web de J5 tiene algunos buenos protocolos. Aquí está el de CPEC: http://j5.jbei.org/j5manual/pages/80.html

Para CPEC, puede consultar el documento de Quan de 2011: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21293463

Ojalá eso ayude.


Ver el vídeo: ADN Clonacion (Diciembre 2021).